具體操作方法如下：

　　1、 測定前的準(zhǔn)備:包括開機(jī)預(yù)熱、按差值標(biāo)定方式標(biāo)定IRGA、將測定用的儀器設(shè)備連接成一個開放系統(tǒng)。取葉片，測定葉面積后將其放入葉室，調(diào)節(jié)控制葉室至葉片的光合作用適溫度。

　　2、 葉片照光及測定操作:

　　1. 改變光源和葉片之間的距離，使到達(dá)葉片表面的光強(qiáng)為200μmol·m·s左右。待IRGA表頭上的指針穩(wěn)定在一個位置后讀取經(jīng)過葉片前后空氣CO2濃度變化的差值，按開放式系統(tǒng)Pn的計算公式計算光合速率。

　　2. 在光源和葉片之間放置一至數(shù)層白紗布，使到達(dá)葉片表面的強(qiáng)度每次減少50μmol·m·s，并在每一光強(qiáng)度下停留2~3min后讀取空氣CO2濃度變化的差值，計算光合速率，直到光強(qiáng)為零，光合速率為負(fù)值時止。

　　3、 繪制葉片光合作用對光的響應(yīng)曲線:將測定的每組數(shù)據(jù)以光強(qiáng)為橫軸，光合速率為縱軸，將每一光強(qiáng)下光合速率值畫到坐標(biāo)紙上的相應(yīng)位置。再將大于0的光合速率值各坐標(biāo)點(diǎn)用直線連接起來，該直線的斜率便是葉片的表觀光合量子效率值。該直線與橫軸的交點(diǎn)為光補(bǔ)償點(diǎn)，與縱軸的交點(diǎn)則為暗呼吸速率(圖2-10)。

　　由于實驗過程中一些難免誤差，所測各點(diǎn)未必都在一條直線上，因此畫線時會帶有一些人為因素，造成表觀光合量子效率值或高或低的誤差。為了避免這一誤差，好是用計算器或計算機(jī)對這些光強(qiáng)-光合速率資料作直線回歸，得到如下一直線回歸方程:

　　Pn=-R+Φ(PFD)

　　這里，Pn為光合速率，R為暗呼吸速率，Φ為表觀光合量子效率，PFD為到達(dá)葉片的光量子通量密度，簡稱光強(qiáng)。

　　操作時的注意事項

　　1. 為減小實驗誤差，用于直線回歸的資料點(diǎn)應(yīng)多一些，以7~8個為宜。在作直線回歸時，不要使用那些光合速率為負(fù)值的資料點(diǎn)。由于Kok效應(yīng)的影響，那些點(diǎn)往往明顯偏離直線，使得到的Φ值偏高或偏低。

　　2. 本節(jié)介紹的是針對用和離體葉片進(jìn)行的測定而言的。目前先進(jìn)的CIRAS-3光合作用測定系統(tǒng)具有控制溫度、光強(qiáng)度等功能，可以方便地進(jìn)行該指標(biāo)的測定。